一种百合隐症病毒胶体金免疫层析检测试剂卡及制备方法

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技术领域	试剂检测
成果用途	用于胶体金免疫层析法快速检测百合隐症病毒(LSV)。
要解决的技术问题	用于胶体金免疫层析法快速检测百合隐症病毒(LSV)。
达到的有益效果	检测时，吸取少量百合样品的待检测溶液，滴在试剂卡槽上壳体第一孔洞处，对比检测线和对照线的颜色，即可判定百合植株是否感染了LSV。 1、检测快速：检测时间只需5～10分钟，可以满足现场检测的需要。 2、检测准确率高、特异性强：本反应与其他百合主要病毒没有交叉反应，检测灵敏度高。 3、携带方便，操作简便：本发明不需要借助其他仪器设备，适合广大基层单位开展百合病毒的检测和防控工作，也适合百合生产的企业、公司以及百合种植的农户使用。
关键技术方案	1.一种百合隐症病毒胶体金免疫层析检测试剂卡的制备方法，： ①兔抗LSV多克隆抗体的制备：从感染了LSV的百合叶片中提取总RNA进行逆转录聚合酶链式反应； ②胶体金标记兔抗LSV多克隆抗体的方法：分别取半径为30nm的胶体金10mL及兔抗LSV多克隆抗体160μg，在pH 7.5的条件下通过磁力搅拌震荡使其结合，加牛血清白蛋白作为稳定剂，且使得终浓度为1%； ③胶体金结合垫的制备：用1/10标记前胶体金溶液体积的重悬液悬浮胶体金－抗体结合物，离心，上清液用喷涂设备涂于玻璃纤维素膜上，37℃烘干，制成胶体金结合垫； ④免疫层析膜的包被：在硝酸纤维素膜上分别包被兔抗LSV多克隆抗体检测线和羊抗兔IgG纯化抗体对照线； ⑤试剂卡的组装：将聚氯乙烯衬板作为支撑载体固定于试剂卡槽下壳体中，然后样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水滤纸依次排列连接于聚氯乙烯衬板上表面； ⑥试剂卡的使用及结果判定：吸取少量百合样品的待检测溶液，滴在所述第一孔洞5～10分钟后，若待检溶液中含有LSV；当检测线没有颜色变化而仅对照线出现棕红色的条带时，则判定被检样品没有感染LSV；所述LSV为百合隐症病毒。
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